Introdução: o teste de Coombs indireto possui relevância por ofertar o diagnóstico da Doença Hemolítica do recém-nascido, em que maioria dos casos justifica-se pela mãe possuir Rh negativo, o pai Rh positivo e a criança herdar o Rh do pai causando incompatibilidade com a genitora. O mesmo também apresenta importância na transfusão sanguínea e no diagnóstico de anemia hemolítica. Objetivo: tal teste apresenta como premissa a detecção de anticorpos que estão no soro do paciente que, através da incubação da amostra junto a hemácias com antigenicidade conhecida e o reagente antiglobulina, oferta o resultado através da formação ou não de aglutinação. Fundamentação teórica: em 1945 foi descrito o teste de Coombs, denominado por teste de antiglobulina humana. O soro antiglobulina humana é utilizado para detectar anticorpos que não causam aglutinação direta das hemácias, o que revolucionou a sorologia dos grupos sanguíneos, possibilitando a descoberta de anticorpos produzidos por aloimunizações decorrentes de transfusão ou gestação. Metodologia: para o exame laboratorial a coleta da amostra não apresenta necessidade de jejum, sendo realizada em tubo de soro com/sem ativador de coágulo e com/sem gel separador. Transcorridos 30 minutos é realizada a centrifugação por 10 minutos a 3000 rpm. Para suspensão de hemácias se segue a ordem: (a) em um tubo de ensaio é colocado 1 ml de soro fisiológico (NaCl 0,9%) com 50 µl de sangue O+ e o homogenizasse na centrifuga por 1 minuto a 3000 rpm; (b) é feita lavagem com soro fisiológico 3x, onde a cada término da centrifugação é retirado o sobrenadante, colocado 1 ml de soro fisiológico no tubo e levado para nova centrifugação. Na última lavagem descarta-se o soro; (c) as hemácias que ficam no fundo do tubo são lavadas com 1 ml de soro fisiológico e é obtido a solução de hemácias purificadas. Para segunda etapa, que é o teste do Coombs indireto, após o preparo se procede na seguinte ordem: (a) no tubo de ensaio com identificação do paciente colocar 100 µl da suspensão de hemácias O+ preparadas com 100 µl do soro do paciente e 2 gotas de albumina bovina, tampar o tubo e incubar em banho maria a 37º C por 15 minutos; (b) após incubação, é feita a lavagem 3x com 1 ml de soro fisiológico na centrifuga a 3000 rpm por 1 minuto igual a preparação da suspensão de hemácias; (c) após a última lavagem, o excesso é descartado com cuidado para não desmanchar o botão hemático; (d) acrescentar ao tubo 2 gotas de soro antiglobulina humana e homogeneizar. Resultados: Caso o soro estiver límpido, o resultado do teste é negativo e o laudo é liberado. Se o soro apresentar grumos ou microcoágulos, o teste é positivo e então é feita a repetição do teste para certificação em duplicata. Havendo dúvida a amostra é enviada para o laboratório de apoio, se não o laudo é liberado. Considerações finais: indubitavelmente o teste de Coombs é uma das técnicas mais importantes no estudo dos grupos sanguíneos, sendo indispensável, principalmente, aos serviços de hemoterapia.